抗体是蛋白质和分子检测与纯化的强大工具。尽管完整抗体（通常是 IgG 或 IgM）适用于大多数免疫分析应用，但某些步骤的性能却通过使用抗体片段（例如 Fab 和 F（ab'）2）得到了增强。本文概述了制备抗体片段的优势、类型和方法。

有时，研究或利用免疫球蛋白的部分活性而不受其他分子片段的干扰，是非常有用的。可以选择性地将免疫球蛋白分子切割成具有离散特征的片段。使用还原剂和蛋白酶消化或切割免疫球蛋白蛋白质的部分结构，完成抗体片段化。尽管可以对所有免疫球蛋白类别进行片段化，但只有小鼠、兔和人 IgG 和 IgM 片段化的步骤得到了很好地表征。

两组主要关注的抗体片段是（a）抗原结合片段（例如 Fab）和（b）不结合抗原的可结晶片段（例如 Fc）。可以得到几种类型的抗原结合片段，但每种都至少包含重和轻免疫球蛋白链（分别为 VH 和 VL）的可变区，通常通过二硫键结合在一起以保留抗体结合位点。Fc 片段由免疫球蛋白的重链恒定区（Fc 区）组成，并介导细胞效应功能。

抗体片段化有点费力，需要优化酶介导的蛋白质消化，并且需要充足的抗体（例如 10 mg）来有效实现。因此，通常仅在可大量获得目标抗体且特定应用需要时才进行片段化。

抗体 IgG 结构和裂解位点的片段化。常用的抗体片段可通过还原铰链区二硫化物或通过木瓜蛋白酶、胃蛋白酶或无花果蛋白酶消化来制备，包括半 IgG、Fab、F（ab'）2 和 Fc。

抗体片段的优点

抗体片段是整个抗体分子中的小型功能元件，与完整抗体相比，抗体片段在某些免疫化学实验技术和应用中具有多种优势：

①减少了 Fc 相互作用导致的非特异性结合（许多细胞具有结合 Fc 区的受体）

②在免疫沉淀和蛋白质印迹实验中，控制 Fc 与蛋白 A 或蛋白 G 结合

③更有效地穿透组织切片，改善免疫组织化学（IHC）染色

④减少大蛋白质表位的位阻，固相应用中抗原检测的灵敏度可能更高

⑤消除抗原抗体结合研究中与 Fc 相关的效应功能（例如补体固定）

⑥利用 X 射线晶体学或 NMR 来研究免疫识别结构区，操作更简便

⑦内源实验时的免疫原性低于完整抗体

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